出入境动物检验检疫技术研究

出版社：孙颖杰 中国海洋大学出版社 (2009-07出版)  

书籍目录

第一章 禽病检测技术 9株水禽H5N1亚型禽流感病毒株主要基因信息分析 PCR快速检测鸭病毒性肠炎标准方法的建立 表达H7亚型禽流感HA基因杆状病毒转移载体的构建及重组病毒的鉴定 不同动物来源新城疫病毒对不同种属细胞的感染性分析 产蛋鸭大肠杆菌疾病的检定及其结果分析 鹅源副粘病毒和新城疫病毒与受体结合动力学比较 鸽源H5N1亚型禽流感病毒株的全基因克隆及序列分析 基因芯片技术检测新城疫病毒 基于DPV UL6基因主要抗原域蛋白免疫组化方法的建立及其在DPV强毒感染鸭组织中定位分布规律的检测 昆虫／杆状病毒表达系统规模化表达禽流感H7HA重组目的蛋白的 利用IBDV VP3蛋白初步建立鸡传染性法式囊病间接El。ISA方法 两株鹅源H5N1亚型禽流感病毒分离株全基因序列分析 禽流感病毒检测方法标准比较及在国际能力验证上应用 禽流感群特异性间接原位RT—PCR检测方法研究 实时荧光定量PCR快速检测鸭病毒性肠炎标准方法的建立 西藏拉萨市H5、H9型禽流感血清学监测 新城疫病毒融合蛋白的真核表达及其单克隆抗体的研制、应用 鸭病毒性肠炎g8基因的原核表达及产物的抗原性分析 鸭肠炎病毒UL6基因8细胞抗原表位预测、主要抗原域蛋白原核表达及其抗体制备 鸭新城疫病毒山东分离株F基因的克隆和序列分析 第二章猪病检测技术 应用实时荧光定量TaqManRT—PCR检测猪水泡病毒的研究 猪水泡病病毒VPl基因的克隆和表达 多重PCR同时检测鉴别口蹄疫、猪水泡和水泡性口炎病毒 非洲猪瘟病毒VP73基因克隆及在大肠杆菌中的高效表达 进境种猪繁殖与呼吸综合征病毒快速检测鉴定初探 口蹄疫通用型实时荧光RT—PCR检测方法的建立 美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒及其变异株（NSP2 1 594～1 680变异RT—PCR鉴别检测方法的建立 猪胸膜肺炎放线杆菌PCR快速分型系统的建立及应用 液相阻断ELISA和IH检测O型口蹄疫抗体相关性研究 乙型脑炎病毒NS3基因实时RT—LAMP快速检测方法的建立 应用实时荧光定量TaqMan RT—PCR检测口蹄疫病毒的研究 猪Ⅱ型圆环病毒检测方法的建立及应用 猪传染性胃肠炎（TGE）病毒在组织细胞上增殖及其抗体的鉴定研究 猪戊型肝炎病毒ELISA检测体系建立及其应用 猪细小病毒SCl株非结构蛋白NSl基因的原核表达及PPA—NS1—ELI：建立 …… 第三章牛羊病检测技术 第四章马病检测技术 第五章水生动物病检测技术 第六章细菌病原体 第七章农兽药残留检测技术 第八章物种鉴定及其他 第九章管理及其他综述类 第十章其他论文摘要

章节摘录

版权页：   插图：   1.8 TaqMan RT—PCR的特异性、敏感性和重复性 用FMDV，VSV以及正常BHK一21细胞、野外采集猪的组织样品和血清进行特异性比较检测。对SVDV RNA样品进行l0倍系列稀释，用常规RT—PCR和TaqMan RT—PCR检测，比较它们的敏感性。为了评估TaqManRT—PCR检测SVDV方法中的组内和组间试验的重现性、稳定性，应用10倍系列稀释的SVDV RNA反复进行TaqMan RT—PCR检测，每次试验的每个样品做6个平行的反应管，重复6次。 2结果 2.1 TaqMan RT—PCR的特异性扩增分析 应用TaqMan RT—PCR对SVDV、FMDV、VSV、正常BHK21细胞等试验样品进行检测。从每个样品TaqMan RT—PCR扩增的平均Ct值中可以看出，SVDV都出现实时荧光增长曲线，有强的实时荧光信号，表现为阳性扩增，不同稀释度的阳性样品Ct值均小于或等于35.00。FMDV、VSV、BKH一21细胞、猪正常组织阴性样品和空白对照的Ct值均大于38.0或无Ct值，无扩增曲线，一直为水平线，试验特异性强，（见图1）。经对大量阳性和阴性样品检测结果的统计分析，确定了Ct值38.0可作为阳性和阴性的临界值（cut—off）。Ct值大于38.0可判为阴性，Ct值小于或等于35.0可判为阳性，在35.0～38.0之问为可疑，须重新试验。荧光定量PCR检测SVDV的特异性强，敏感性高，重复性很好。 2.2 引物和探针及其浓度的筛选 TaqMan RT—PCR反应混合物中引物、探针之间的非特异性分子竞争抑制会影响到扩增效率和敏感性，需要选择引物和探针的最佳浓度配比，以获得TaqManRT—PCR反应的最低Ct值和最高&Rn，提高扩增效率和敏感性。

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