生物化学实验教程

出版时间：2012-7  出版社：科学出版社  作者：周正义 编  页数：311  字数：480000  

内容概要

　　《普通高等教育“十二五”重点规划教材·生命科学应用型系列教材：生物化学实验教程》分四个部分，第一部分是实验的基础理论部分，包括生物化学须知、生物大分子提取与分离、分光光度法及比色分析法、电泳法技术、层析技术、离心技术、透析技术。第二部分以实验为主体，阐述了常用的基础实验技术、综合性实验、设计性实验。《普通高等教育“十二五”重点规划教材·生命科学应用型系列教材：生物化学实验教程》的目的是培养学生严谨的科学态度，独立思维以及独立完成实验过程的能力。
　　《普通高等教育“十二五”重点规划教材·生命科学应用型系列教材：生物化学实验教程》适用于高等院校的生物科学、生物技术、生物工程、动物科学、农业科学、园艺、食品科学等专业学生使用，也可供相关技术人员参考。

书籍目录

第一部分 生物化学技术概论
1 生物化学须知
1.1 生物化学实验技术发展简史
1.2 实验室规则
1.3 实验室安全及防护知识
1.4 实验报告
1.5 实验室基本操作
1.6 缓冲溶液与pH测定
1.7 生化实验室的基本设施与装备
2 生物大分子提取与分离
2.1 实验材料的处理
2.2 生物材料处理的常用方法
2.3 目的物分离与提取
2.4 目的物的沉淀分离
2.5 过滤与膜分离技术
2.6 溶剂萃取法
2.7 反胶束萃取
2.8 超临界（流体）萃取
3 分光光度法及比色分析法
3.1 原理
3.2 分光光度计的构造
3.3 7220型分光光度计
4 电泳法
4.1 电泳的基本原理
4.2 影响电泳的主要因素
4.3 区带电泳的分类
4.4 几种常见的电泳方法
5 层析技术
5.1 层析技术概述
5.2 凝胶层析
5.3 离子交换层析
5.4 亲和层析
5.5 具体的一些层析方法
5.6 高效液相色谱
6 离心技术
6.1 基本原理．
6.2 离心机的主要构造和类型
6.3 离心技术的应用
6.4 电动离心机的使用方法及注意事项
7 透析
7.1 膜
7.2 溶剂
7.3 物理条件
7.4 董南（Donnan）膜平衡
第二部分 生物化学实验
实验1 生物化学基础实验
实验1.1 糖类的性质实验（糖的颜色反应）
实验1.2 糖类的性质实验（糖的还原作用）
实验1.3 总糖的测定——硫酸蒽酮法
实验1.4 血糖的定量测定
实验1.5 3，5-二硝基水杨酸比色法测定糖的含量
实验1.6 糖的薄层层析
实验1.7 粗脂肪的定量测定——索氏抽提法
实验1.8 脂肪酸的β-氧化
实验1.9 碘值的测定
实验1.10 酸价的测定
实验1.11 胆固醇的测定
实验1.12 卵磷脂的提取及鉴定
实验1.13 氨基酸的分离鉴定——纸层析法
实验1.14 氨基酸分离——双向层析法
实验1.15 蛋白质的沉淀反应、颜色反应及等电点的测定
实验1.16 双缩脲法测定蛋白质含量
实验1.17 Folin-酚法测定蛋白质含量
实验1.18 微量凯氏定氮法
实验1.19 SDS-PAGE测定蛋白质分子量
实验1.20 葡聚糖凝胶层析脱盐
实验1.21 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白
实验1.22 血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳
实验1.23 考马斯亮蓝法测蛋白质浓度
实验1.24 紫外吸收法测定蛋白质含量
实验1.25 脲酶Km值简易测定法
……
附录
主要参考文献

章节摘录

版权页：   插图：   2.4.2.4 复合沉淀法 在溶液中加入某些物质，使它与蛋白质等形成复合物而沉淀下来，从而达到分离的方法，称为复合沉淀法。分离出复合沉淀后，有的可以直接应用，如菠萝蛋白酶用单宁沉淀法得到的单宁一菠萝蛋白酶复合物，可以直接作为药品，用于治疗咽喉炎等。也可以再用适当的方法，使酶从复合物中析出，而进一步纯化。 常用的复合沉淀剂有单宁、聚乙二醇、聚丙烯酸等高分子聚合物。 例如，以单宁为沉淀剂进行酶的复合沉淀，在操作时，先将酶溶液调节到一定的pH（不同的酶，应调节在不同的pH，一般控制在pH 4～7的范围内），然后加入一定量的单宁（一般单宁的加入量，为酶溶液的0.1％～1％），生成酶一单宁复合物沉淀。分离出的酶一单宁复合物可以直接应用。如果要进一步纯化，可将沉淀分离出来后，用乙醇或丙酮处理以除去单宁；也可以用pH8～11的碘酸钠或硼酸钠处理，使酶溶解出来，而单宁仍然为沉淀；还可以采用吐温60（聚氧乙烯山梨糖醇硬脂酸酯）、吐温80（聚氧乙烯山梨糖醇油酸酯）、分子量大于6000的PEG（聚乙二醇）或PVP（聚乙烯氮戊环酮）等大分子进行复分解反应。这些大分子聚合物可与单宁形成难溶于水的树脂状沉淀，而使酶游离出来。单宁复合沉淀法适用于各种来源的蛋白酶、淀粉酶、糖化酶、果胶酶、纤维素酶等的沉淀分离。 再如，聚丙烯酸也可以作为复合沉淀剂，用于酶的沉淀分离。在使用时，将酶液调节至pH 3～5，加入适量的聚丙烯酸（一般为酶蛋白量的30％～40％），生成酶一聚丙烯酸沉淀。进一步纯化是将沉淀分离出来后，用稀碱液调节pH至6以上，则复合物中的酶与聚丙烯酸分开，再加入一定量的Ca2+、M92+、Al3+等金属离子，与聚丙烯酸反应生成聚丙烯酸盐沉淀，而使酶游离出来。分离得到的聚丙烯酸盐沉淀，可以用1mol／L硫酸处理，回收聚丙烯酸循环使用。 2.4.2.5金属盐沉淀法 利用溶液中某种溶质与某些金属离子反应，生成金属盐沉淀，而与其他组分分离的方法称为金属盐沉淀法。常用的金属盐沉淀法有钙盐沉淀法、铅盐沉淀法等。 例如，在核酸的水提取液中，加入一定体积比（一般为10％左右）的10％氯化钙溶液，使DNA和RNA均形成钙盐，再加入1／5体积的乙醇，DNA—Ca即沉淀析出。 再如，在含有倍半萜的乙醇抽提液中，加入4％的乙酸铅溶液，减压除去乙醇，即可得到倍半萜的铅盐沉淀。脱铅的方法通常是通人硫化氢气体，生成溶解度更小的硫化铅，而得到倍半萜。

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